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1、作为细菌细胞的DNA连接酶的能量供体。与古菌、真核生物和病毒编码的DNA连接酶使用ATP作为能源不同的是，细菌（如大肠杆菌）的DNA连接酶使用氧化型的辅酶I作为能源。

2、参与蛋白质的ADP-核糖基化修饰。细胞内有多种蛋白质可以发生ADP-核糖基化修饰，包括单ADP-核糖基化修饰和多聚ADP-核糖基化修饰，其中的ADP-核糖基都来自辅酶I，被修饰的氨基酸残基一般是Arg。

例如：霍乱毒素可催化Gs蛋白的ADP-核糖基化修饰，百日咳毒素可催化Gi蛋白的ADP-核糖基化修饰，白喉毒素可催化古菌和真核生物的核糖体移位因子的ADP-核糖基化修饰。

还有，真核生物的组蛋白也可以发生ADP-核糖基化修饰，这种修饰也能影响到基因的表达，从而产生表观遗传。

3、参与组蛋白的去乙酰化修饰组蛋白的乙酰化修饰可以说是最重要的与组蛋白有关的表观遗传标记。码御这种修饰是可逆的，催化反方向的去乙酰化修饰有两类酶，其中有一类是需要辅酶I的。

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